Стандарты мутности и их применение

• 
  ряде случаев количество клеток в суспензии бывает достаточно определить визуально путем сравнения со стандартом мутности. Стандар-ты мутности, выпускаемые государственным НИИ стандартизации и кон-троля медицинских и биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича, представляют собой взвесь частиц стекла пирекс в дистиллированной воде. За единицу стандарта мутности общего назначения условно принята мут-ность суспензии в физиологическом растворе бактерий - возбудителей ти-фа с концентрацией клеток 100 млн/мл. Стандарт мутности включает 4 эталона на 10, 11, 9 и 5 единиц, что соответствует содержанию 1-10 ; 1,1-Ю⁹; 0,9-10⁹ и 0,5-Ю⁹ клеток в 1 мл взвеси. Для определения количества клеток пробирку с исследуемой суспензией ставят рядом с эталоном 10 и рассматривают их в отраженном и проходящем свете на фоне белого листа бумаги, в центре которого нанесено несколько черных линий.
  

1. Приготовьте последовательные 10-кратные разведения исходной

суспензии дрожжей: 10^-1 , 10^-2 , 10^-3 (к 4,5 мл дистиллированной воды до-бавьте 0,5 мл суспензии дрожжей).

2. 
   При увеличении 20 х или 40 х проведите подсчет клеток дрожжей
   

• 
  камере Горяева под микроскопом.
  

3. 
   Результаты работы оформите в виде табл. 3.
   

1. 
   Приготовьте последовательные 10-кратные разведения исходной суспензии дрожжей: 10^-1, 10-², 10-³, 10-⁴, 10-⁵ (к 4,5 мл дистиллированной воды добавьте 0,5 мл суспензии дрожжей).
   

2. 
   Полученные разведения суспензии микроорганизмов тщательно перемешайте (встряхните) и высейте на поверхность агара в чашке Петри (в объеме 0,1 или 0,2 мл). Посев производите, начиная с наибольшего раз ведения (10-⁵).
   

3. 
   Равномерно распределите на поверхности агара высеянную сус пензию, медленно вращая чашки Петри, и оставьте их при комнатной тем пературе на 30 мин для адсорбции микробов на поверхности агара.
   

4. 
   Засеянные чашки Петри поместите в термостат с температурой 37 °С
   

• 
  инкубируйте 24 - 48 ч (в зависимости от вида микроорганизмов). После этого произведите учет выросших колоний. Учитывать необходимо те чашки, на которых число колоний находится в диапазоне от 10 до 150 и общее число подсчитанных колоний при высеве из данного разведения должно быть не менее 300. При соблюдении этих условий учет результа тов будет правильным.
  

5. 
   Результаты работы оформите в виде табл. 4.
   

Лабораторная работа № 19

5. 
   и 10 единиц, спиртовка, стерильная дистиллированная вода, чистые культуры дрожжей, стерильные пипетки вместимостью 1 - 2 мл, стериль-ные пробирки.
   

1. 
   Ознакомьтесь с правилами пользования бактериальным стандар том мутности.
   

2. 
   Стерильной пипеткой отберите 1 мл исходной суспензии дрожжей в стерильный флакон или мерную колбу вместимостью 100 мл или более.
   

3. 
   В соответствии с правилами пользования бактериальным стан дартом мутности определите концентрацию суспензии.
   

4. 
   Запишите в тетрадь последовательность этапов определения кон центрации и результат, который Вы получили.
   

Лабораторная работа № 20

1. 
   Приготовьте фиксированный препарат дрожжей (0,2 или 0,3 мл исследуемой суспензии нанесите микропипеткой на хорошо обезжиренное сухое предметное стекло, помещенное на миллиметровую бумагу с очер-ченной площадью в 4 или 6 см², добавьте каплю стерильного 0,03%-ного водного раствора агар-агара, быстро перемешайте стерильной бактериоло-гической петлей и равномерно распределите на площади отмеченной на бумаге, высушите мазок на воздухе, зафиксируйте 96%-ным спиртом в те-чение 20-30 мин).
   

2. 
   Окрасьте полученный препарат основным фуксином или метиле-новым синим в течение 2 мин и промойте его, погружая в воду и меняя во ду до тех пор, пока после очередного погружения вода не останется бес цветной. Высушите препарат на воздухе.
   

2. 
   Клетки подсчитывайте с иммерсионным объективом в квадратах окулярной сетки (не менее 10 полей зрения), передвигая препарат по диа гонали.
   

2. 
   Рассчитайте среднее количество клеток в квадрате сетки (поле
   

зрения).

2. 
   Результаты работы оформите с виде табл. 5.
   

Таблица 5