Подсчет клеток микроорганизмов под микроскопом
Подсчитать клетки микроорганизмов под микроскопом можно ис-пользуя счетные камеры, капилляры Перфильева, препараты фиксирован-ных и окрашенных клеток, приготовленные на предметных стеклах или мембранных фильтрах. Перечисленные методы позволяют определить общее количество клеток в единице объема. Следует помнить, что под-считывают все клетки, как живые, так и мертвые.
Подсчет клеток в счетных камерах. Этот метод рекомендуется использовать для подсчета крупных объектов - дрожжей, одноклеточных водорослей, конидий грибов и некоторых относительно крупных бактерий. Обычно используют камеру Горяева - Тома, хотя можно применять и дру-гие счетные камеры. При работе с камерой необходимо соблюдать опреде-ленный порядок ее заполнения. Вначале углубление с сеткой покрывают специальным шлифованным покровным стеклом и, слегка прижимая, сме-щают покровное стекло в противоположные стороны до появления колец Ньютона. Эти кольца указывают на то, что покровное стекло притерто к сторонам камеры. Только при таком условии объем взвеси микроорганиз-мов, находящийся в камере, соответствует расчетному. После этого камеру заполняют исследуемой суспензией микроорганизмов. Суспензию вносят через бороздку камеры капилляром или пипеткой. Подсчет клеток реко-мендуется начинать через 3 - 5 мин после заполнения камеры, чтобы клет-
ки осели и при микроскопировании были видны в одной плоскости. Под-вижные клетки перед заполнением камеры убивают нагреванием или сус-пендированием в 0,5%-ном водном растворе формалина.
Число клеток подсчитывают с объективом 8х или 40х. С иммерсион-ным объективом работать нельзя, так как его фокусное расстояние меньше толщины стекла камеры. Обычно подсчитывают клетки микроорганизмов
-
10 больших или 20 маленьких квадратах сетки, перемещая последние по диагонали. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также клетки, пересекающие верхнюю и правую стороны квадрата. При подсчете количество клеток в большом квадрате не должно превышать 20, а в малом - 10, в противном случае исходную суспензию разводят водопроводной во-дой. Для получения достоверного результата общее число подсчитанных клеток микроорганизмов должно быть не менее 600. Подсчет клеток по-вторяют 3 - 4 раза, каждый раз заново монтируя камеру и заполняя ее ис-следуемой взвесью микроорганизмов. Это обеспечивает большую точ-ность, чем подсчет 600 клеток при однократном монтаже камеры. Количе-ство клеток в 1 мл исследуемой суспензии вычисляют по формуле
Достарыңызбен бөлісу: |