Метод открытый метод Role-Łuszczak et al. (2013)

1) Дизайн и последовательность праймеров

ПЦР-размер продукта: 120 bp.

Реакционные растворы смешивают (кроме образца ДНК) перед добавлением в отдельные реакционные трубки. Один отрицательный контроль (двойная дистилляция H₂О) на каждые пять образцов следует добавить один положительный контроль. Общие объемы смесей рассчитываются путем умножения указанных объемов на общее количество образцов, включая контрольные, плюс один.

Реакционная смесь для каждого ПЦР-теста содержит 12,5 мкл основной смеси 2×ПЦР, 0,4 мкм каждого праймера и 0,2 мкм специфического зонда BLV и 500 ng экстрагированной геномной ДНК, используя конечный реакционный объем 25 мкл. 

Амплификация проводилась в соответствии с следующие условия: начальная инкубация и активация полимеразы при 95°С в течение 15 минут, денатурация при 94°С в течение 60 секунд, отжиг при 60°С в течение 60 секунд через 50 циклов.

Mix ПЦР-реагенты и используйте отдельные перчатки или открывалки для каждой отдельной трубки при добавлении образцов ДНК. Положите образцы на лед. Поместите образцы в Термоблок и работайте с соответствующими параметрами.

а) положительные пробы - это пробы с Ct меньше или равны 40,95.

б) Отрицательные пробы - это пробы без значения Ct или пробы со значением больше 40,96.

с) Анализ должен быть повторен, если положительный контроль остался отрицательным, или если отрицательный контроль воды является положительным. Образцы на границе отсечения (например, Ct 40) должны быть повторно протестированы и подтверждены.

в) Подтверждающее тестирование

Для подтверждения идентификации продукты ПЦР могут быть секвенированы.

2. 
   
   
   жүктеу 51,05 Kb.
   
   Достарыңызбен бөлісу: