СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ ТЕСТ
Заражение вирусом крупного рогатого скота происходит на протяжении всей жизни и вызывает стойкий ответ антител. Антитела могут быть сначала обнаружены 3-16 недель после заражения. Материнские антитела могут исчезнуть в течение 6 или 7 месяцев. Нет способа отличить пассивно переносимые антитела от антител, полученных в результате активной инфекции. Активная инфекция, однако, может быть подтверждена обнаружением провируса BLV методом ПЦР. Пассивные антитела, как правило защищают телят от инфекции. В перипартриентный период у коров могут быть сывороточные антитела, которые не обнаруживаются РИДом из-за сдвига антител из циркуляции плотины в ее молозиво.
Поэтому, когда используя тест AGID, отрицательный результат теста на сыворотке, взятой в это время (2-6 недель до и 1-2 недели после родов) не является окончательным, и тест следует повторить. Однако AGID может быть выполнен на этой стадии с молозивом первой фазы.
Наиболее легко обнаруживаются антитела, направленные на gp51 и p24 вируса. Большинство тестов AGID и Elisa при обычном использовании обнаруживают антитела к гликопротеину gp51, как они появляются раньше. Методы проведения этих тестов были опубликованы (Dimmock et al., 1987; Европейская Комиссия, 2009). Elisa обычно более чувствительны, чем тесты AGID.
Слабые положительные и отрицательные эталонные сыворотки МЭБ для использования в ИФА доступны в лиофилизированной, облученной форме из референс-лаборатории МЭБ в Германии (см. таблицу, приведенную в части 4 настоящего наземного руководства). Калибровка этих сывороток основана на аккредитованной эталонной сыворотке МЭБ, названной E05, которая была валидирована по сравнению с прежней эталонной сывороткой E4 различными AGID и Elisa.
ИФА
Можно использовать как косвенный, так и блокирующий ИФА. Анализы, основанные на обоих из них, доступны в продаже; для образцов сыворотки или молока могут потребоваться различные наборы. Некоторые Elisa достаточно чувствительны, чтобы их можно было использовать с Объединенными образцами. Elisa выполняются в твердофазных микропланшетах. Антиген BLV используется для покрытия пластин либо непосредственно, либо с помощью захватывающего поликлонального или моноклонального антитела (MAb). Антиген получают из супернатанта клеточной культуры стойко инфицированных BLV-инфекций. клеточная линия. Фетальные клетки почки ягненка (FLK) наиболее часто используются для коммерческих тестов (Van der Maaten & Miller, 1976). С 2004 года появилась новая клеточная линия BLV-продуцирующая PO714, которая свободна от других вирусных инфекций и содержит провирус бельгийской подгруппы (Beier et al., 2004). Антиген используют в заранее определенном разведении (например, 1/10) в фосфатном буферном физиологическом растворе. В комплектном виде пластины иногда приобретаются предварительно покрытыми. Некоторые консерванты могут быть добавлены в молоко образцы для предотвращения скисания. Законсервированные образцы обычно не сильно портятся при хранении до 6 недель при температуре 4°C.
Достарыңызбен бөлісу: |