) Ложно-отрицательный результат

Следует отметить, что только небольшая часть PBMC может быть инфицирована, что ограничивает чувствительность анализа. Присутствие ингибирующих веществ в некоторых образцах может привести к ложноотрицательным результатам. Чтобы обнаружить это, по крайней мере один положительный контроль используется на каждом тестовом прогоне. Кроме того, анализы могут использовать внутренние средства контроля (имитатор), которые добавляются к каждому образцу.

 Имитатор-это модифицированная молекула-мишень, которая амплифицируется теми же праймерами, что и реальная мишень, но генерирует продукт ПЦР с различным размером, который может быть визуализирован с помощью электрофореза в агарозном геле.

Имитатор добавляется в низкой концентрации, что способствует усилению реальной мишени (Ballagi-Pordany & Belak, 1996). Однако мимикрирующий может соперничать с истинной мишенью. Поэтому, возможно, потребуется проанализировать каждый образец с имитатором или без него.

2. 
   Пробоподготовка
   

PBMC отделяют от образцов крови ЭДТА методом центрифугирования с разделением плотности . В качестве альтернативы можно использовать охристую шерсть или даже цельную кровь, например там, где образцы были заморожены.

Опухоли или другие ткани должны быть гомогенизированы до 10% - ной суспензии.