Резюме описание и значение заболевания


Блокирующий иммуноферментный анализ - сывороточный ИФА



жүктеу 51,05 Kb.
бет12/20
Дата16.01.2022
өлшемі51,05 Kb.
#32589
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   20
2.04.10 МЭБ лейкоз на рус.яз

2.1.1. Блокирующий иммуноферментный анализ - сывороточный ИФА

Следующий метод подходит для обнаружения антител в единичных или объединенных образцах сыворотки крови.





        1. Процедура испытания




  1. Покрытие плиты

Все лунки покрывают антителом BLV, предварительно разведенным в буфере покрытия (100 мкл/лунка), пластину герметизируют и инкубируют в течение 18 часов при температуре 4°С. Выполняется цикл промывки (стандартная промывка), который состоит из трех промывок, заполняющих лунки до верха, с 3-минутным замачиванием между каждой промывкой, а затем пластина промокается. Добавляют BLV-антиген, предварительно разведенный в промывочном буфере (100 мкл/лунка), пластину герметизируют и инкубируют в течение 2 часов при 37°С. Выполняется стандартный цикл стирки.

  1. Подготовка и добавление проб и средств контроля

Положительные и отрицательные контрольные сыворотки предварительно разбавляют (1/2) в промывочном буфере и добавляют раствор в четыре лунки на каждую контрольную (100 мкл/лунку). Для тестирования Объединенных образцов можно насыпать 80 сывороток , затем разбавить (1/2) промывочным буфером и добавить раствор в две лунки (100 мкл/лунка) на образец. Единичные пробы следует разбавлять 1/100 с помощью промывочного буфера и добавлять раствор в две лунки (100 мкл/лунку) на каждую пробу. После нанесения покрытия на образцы пластину герметизируют и инкубируют в течение 18 часов при температуре 4°C. Кратковременная промывка производится путем заполнения колодцев и немедленного их опорожнения.

  1. Получение и добавление конъюгатов и субстрата

Предварительно разведенное биотинилированное антитело добавляют (100 мкл/лунку) во все лунки – предварительно разведенное с использованием промывочного буфера + 10% фетальной телячьей сыворотки – пластину герметизируют и инкубируют на качающемся столе в течение 1 часа при температуре 37°С. Cтандартная промывка производится так, как описано ранее. Пероксидазосодержащий конъюгат предварительно разбавляют в промывочном буфере и добавляют раствор во все лунки (100 мкл/лунку). Пластину герметизируют и инкубируют на качающемся столе в течение 30 минут при 37°С. проводят стандартную промывку. Во все лунки добавляют 100 мкл ортофениламин-диаминового субстрата пластину закрывают крышкой и оставляют в темноте на 9 минут. Реакцию останавливают 100 мкл 0,5 м серной кислоты на лунку.

жүктеу 51,05 Kb.

Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   8   9   10   11   12   13   14   15   ...   20




©g.engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет
рсетілетін қызмет
халықаралық қаржы
Астана халықаралық
қызмет регламенті
бекіту туралы
туралы ережені
орталығы туралы
субсидиялау мемлекеттік
кеңес туралы
ніндегі кеңес
орталығын басқару
қаржы орталығын
қаржы орталығы
құрамын бекіту
неркәсіптік кешен
міндетті құпия
болуына ерікті
тексерілу мемлекеттік
медициналық тексерілу
құпия медициналық
ерікті анонимді
Бастауыш тәлім
қатысуға жолдамалар
қызметшілері арасындағы
академиялық демалыс
алушыларға академиялық
білім алушыларға
ұйымдарында білім
туралы хабарландыру
конкурс туралы
мемлекеттік қызметшілері
мемлекеттік әкімшілік
органдардың мемлекеттік
мемлекеттік органдардың
барлық мемлекеттік
арналған барлық
орналасуға арналған
лауазымына орналасуға
әкімшілік лауазымына
инфекцияның болуына
жәрдемдесудің белсенді
шараларына қатысуға
саласындағы дайындаушы
ленген қосылған
шегінде бюджетке
салығы шегінде
есептелген қосылған
ұйымдарға есептелген
дайындаушы ұйымдарға
кешен саласындағы
сомасын субсидиялау