»• AS
sV где М -
количество клеток в 1 мл исследуемого субстрата;
- среднее число клеток в квадрате окулярной сетки (поле зрения); s - площадь квадрата окулярной сетки (поля зрения), мкм2;
V - объем нанесенной на стекло суспензии, мл; S - площадь приготовленного мазка, мкм ;
п - разведение исследуемого субстрата.
Подсчет клеток на мембранных фильтрах. Этот метод применяют при определении количества микроорганизмов в различных водоемах, при санитарно-бактериологических и некоторых других исследованиях. Фильтрование пробы определенного объема (от нескольких миллилитров до десятков литров) позволяет сконцентрировать на поверхности фильтра содержащиеся в пробе клетки микроорганизмов. Затем их окрашивают и подсчитывают.
Определение количества клеток высевом на плотные питательные среды (чашечный метод Коха)
основе метода лежит принцип Коха, согласно которому каждая ко-лония является потомством одной клетки. Это позволяет на основании числа колоний, выросших после посева на плотную питательную среду определенного объема исследуемой суспензии, судить об исходном содер-жании в ней клеток микроорганизмов. Результаты количественного учета микроорганизмов, проведенного методом Коха, часто выражают не в числе клеток, а в условных единицах - так называемых колониеобразующих еди-ницах (КОЕ).
Определение числа микроорганизмов этим методом включает три этапа: приготовление разведений, посев на плотную среду в чашки Петри и подсчет выросших колоний.
Посев. Высевать суспензию можно поверхностным или глубинным способом. Перед посевом поверхностным способом разливают расплавлен-ную, чаще всего агаризованную, питательную среду в ряд стерильных чашек Петри по 15 - 20 мл в каждую. Чашки оставляют на горизонтальной поверх-ности, пока среда не застынет. Поверхность агаризованных сред перед посе-вом рекомендуется подсушивать для удаления конденсационной воды.
После того как среда готова, на ее поверхность стерильной пипеткой наносят точно измеренный объем (0,05 или 0,1 мл) соответствующего раз-ведения и равномерно распределяют по поверхности среды.
При глубинном посеве точно измеренный объем (как правило, 0,1; 0,5 или 1,0 мл) исходной суспензии или разведения вносят в расплавленную и остуженную до 48 - 50 °С агаризованную среду, тщательно перемешивают и затем немедленно выливают в чашку Петри. Среде дают застыть.
Достарыңызбен бөлісу: |