Подсчет клеток микроорганизмов под микроскопом
Подсчитать клетки микроорганизмов под микроскопом можно ис-пользуя счетные камеры, капилляры Перфильева, препараты фиксирован-ных и окрашенных клеток, приготовленные на предметных стеклах или мембранных фильтрах. Перечисленные методы позволяют определить общее количество клеток в единице объема. Следует помнить, что под-считывают все клетки, как живые, так и мертвые.
Подсчет клеток в счетных камерах. Этот метод рекомендуется использовать для подсчета крупных объектов - дрожжей, одноклеточных водорослей, конидий грибов и некоторых относительно крупных бактерий. Обычно используют камеру Горяева - Тома, хотя можно применять и дру-гие счетные камеры. При работе с камерой необходимо соблюдать опреде-ленный порядок ее заполнения. Вначале углубление с сеткой покрывают специальным шлифованным покровным стеклом и, слегка прижимая, сме-щают покровное стекло в противоположные стороны до появления колец Ньютона. Эти кольца указывают на то, что покровное стекло притерто к сторонам камеры. Только при таком условии объем взвеси микроорганиз-мов, находящийся в камере, соответствует расчетному. После этого камеру заполняют исследуемой суспензией микроорганизмов. Суспензию вносят через бороздку камеры капилляром или пипеткой. Подсчет клеток реко-мендуется начинать через 3 - 5 мин после заполнения камеры, чтобы клет-
ки осели и при микроскопировании были видны в одной плоскости. Под-вижные клетки перед заполнением камеры убивают нагреванием или сус-пендированием в 0,5%-ном водном растворе формалина.
Число клеток подсчитывают с объективом 8х или 40х. С иммерсион-ным объективом работать нельзя, так как его фокусное расстояние меньше толщины стекла камеры. Обычно подсчитывают клетки микроорганизмов
10 больших или 20 маленьких квадратах сетки, перемещая последние по диагонали. Учитывают все клетки, лежащие в квадрате сетки, а также клетки, пересекающие верхнюю и правую стороны квадрата. При подсчете количество клеток в большом квадрате не должно превышать 20, а в малом - 10, в противном случае исходную суспензию разводят водопроводной во-дой. Для получения достоверного результата общее число подсчитанных клеток микроорганизмов должно быть не менее 600. Подсчет клеток по-вторяют 3 - 4 раза, каждый раз заново монтируя камеру и заполняя ее ис-следуемой взвесью микроорганизмов. Это обеспечивает большую точ-ность, чем подсчет 600 клеток при однократном монтаже камеры. Количе-ство клеток в 1 мл исследуемой суспензии вычисляют по формуле
Достарыңызбен бөлісу: |