VII. УЧАСТИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В КРУГОВОРОТЕ ВЕЩЕСТВ В ПРИРОДЕ
Микроорганизмы активно участвуют в процессах разложения орга-нических азотсодержащих веществ, в превращении углеводов в органиче-ские кислоты и другие продукты, в восстановлении неорганических соеди-нений серы до сероводорода и окисления соединений железа, способствуя круговороту веществ.
Лабораторная работа № 27 Получение
накопительной культуры денитрифицирующих бактерий
Цель работы. Освоить метод получения накопительной культуры денитрифицирующих бактерий, методы определения нитратов, нитритов и аммиака в среде культивирования.
Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные стекла, почва, бактериологические петли, спиртовка, пинцет, скальпель, компоненты для среды Гильтая или готовая среда в пробирках, парафиновое или вазелино-вое масло, красная лакмусовая бумага, 1%-ный водный раствор фуксина или генцианвиолета, дифениламин, 20%-ный раствор серной кислоты, 10%-ный раствор хлорида бария, цинк-йод-крахмал, реактив Несслера.
Ход выполнения работы
Приготовьте среду Гильтая следующего состава, г/л: лимонно кислый калий или натрий (трехзамещенный) - 5,0; KNO3 - 2,0, KH2PO4 - 2,0; MgSO4 - 2,0; CaCO3 - 0,2; аспарагин - 1,0; FeCl3 - следы; вода водо проводная. рН среды доведите до 6,8 - 7,2 10%-ными растворами NaOH и HCl. Среду разлейте в пробирки высоким слоем и стерилизуйте в автокла ве при 0,5 атм 20 мин.
Поместите в пробирки со средой комочек почвы, на поверхность среды аккуратно по стенке пробирки налейте 0,2 мл вазелинового масла для создания анаэробных условий и инкубируйте в термостате при 30 -37 °С в течение 1 - 2 недель. Одну пробирку оставьте незасеянной в качестве кон троля.
Через 7 - 1 4 сут просмотрите посевы, отметьте помутнение сре ды, выделение газов, изменение цвета (сине-зеленый цвет является следст вием размножения бактерий Pseudomonas aeruginosa).
Проведите тесты на наличие аммиака и отсутствие нитратов и нитритов. Аммиак обнаруживают по запаху и посинению красной лакму совой бумаги или с помощью реактива Несслера. Нитраты и нитриты об наруживают по реакции с реактивом цинк-йод-крахмал: к трем каплям цинк-йод-крахмала добавляют одну каплю 20%-ного раствора серной ки слоты и одну каплю исследуемой среды. Синий цвет свидетельствует о на личии азотистой кислоты.
Приготовьте фиксированные мазки полученных культур, по красьте и микроскопируйте. Зарисуйте морфологию клеток денитрифици рующих бактерий.
Лабораторная работа № 28
Достарыңызбен бөлісу: |