Материалы и оборудование. Сухие питательные среды, жидкие (МПБ, пептонная вода), плотные (МПА, среда Эндо, кровяной агар), полу-жидкие среды, специальные (среда Чапека для грибов), элективные (среда Китта-Тароцци для анаэробов), дифференциально-диагностические (среды Гисса с углеводами, среда Плоскирева или среда Левина), чистые культу-ры бактерий, выращенные на жидких, полужидких и плотных питательных средах, бактериологические петли; спиртовка; термостат с температурой 37 °С; микроскоп; столик для окрашивания препаратов; промывалка с во-дой; фильтровальная бумага; карболовый фуксин Циля; дистиллированная вода; иммерсионное масло для микроскопии.
Ход выполнения работы
Ознакомьтесь с питательными средами. Составьте таблицу клас сификации питательных сред по их составу, консистенции и назначению.
Внимательно рассмотрите характер роста различных бактерий на жидких, полужидких и плотных питательных средах, используя готовые демонстрационные посевы.
Опишите и зарисуйте рост бактерий на различных питательных
средах.
Сделайте посев бактерий на жидкую, полужидкую и плотную пи тательную среды.
Лабораторная работа № 14 Получение
накопительной и чистой культур бактерий
Цель работы. Освоить метод накопительных культур и выделения чистых культур бактерий (по Коху).
Материалы и оборудование. 1 г сена или травы, 20 - 30 мл водо-проводной воды, электрическая плитка или водяная баня, стерильные про-бирки, пробирки с МПБ и скошенным МПА (косяки) и чашки Петри с МПА; культуры бактерий, выращенные на МПА в чашках Петри; бакте-риологические петли; спиртовка; термостат с температурой 37 0С.
Ход выполнения работы
Для получении накопительной культуры спорообразующих бак терий 1 г сена или травы поместите в колбу объемом 100 - 150 мл, налейте 20 - 30 мл водопроводной воды, подогретой до 40 - 50 °С и оставьте на 30 мин при комнатной температуре.
Через 30 мин воду отделите от сена, сделайте посевы на чашки Петри с МПА, оставшуюся воду разлейте в 3 - 4 пробирки по 5 - 7 мл, за кройте ватно-марлевыми (или ватными) пробками, прогрейте в кипящей водяной бане 1 5 - 2 0 мин, охладите до комнатной температуры и после этого поместите чашки Петри и пробирки в термостат с температурой 37°Сна3-7сут.
На следующем занятии (через 3 - 7 сут) из содержимого пробирок приготовьте фиксированные мазки и окрасьте их по Граму и методом ок раски спор, как описано в теоретической части. Просмотрите приготов ленный Вами препарат с иммерсионной системой и зарисуйте в альбом грамположительные палочки (Bacillus subtilis) и эндоспоры внутри бакте риальных клеток.
Внимательно рассмотрите рост культуры в чашке Петри.
Выберите любую изолированную колонию на чашке с МПА. Оха рактеризуйте ее: по величине (крупная - диаметром более 4 - 6 , средняя - 2-4, мелкая - 1 - 2, точечная - меньше 1 мм); форме (округлая, амебоид ная, ризоидная); оптическим свойствам (прозрачная, матовая, флуоресци рующая, полупрозрачная, непрозрачная, блестящая); цвету; поверхности (гладкая, шероховатая, складчатая, бугристая); профилю (плоская, выпук лая, кратерообразная, врастающая в агар); краю колонии (ровный, волни стый, лопастной, ризоидный); структуре (однородная, мелко- или крупно-
зернистая); консистенции (маслянистая, тестообразная, вязкая, пленчатая).
Характеристики колонии запишите и зарисуйте колонию в альбом.
Пересейте выбранную колонию в пробирки с МПА, МПБ и чашку Петри с МПА.
Посевы поместите в термостат с температурой 37 0С.
Через 24 - 48 ч просмотрите посевы на МПА. При правильном посеве все колонии должны быть однородными и по характеристикам со ответствовать исходной (материнской) колонии.
Приготовьте фиксированный окрашенный препарат из колонии на МПБ и МПА и окрасьте его по Граму.
Просмотрите приготовленный Вами препарат с иммерсионной системой и тоже зарисуйте в альбом. Если в мазках из выросших посевов на МПБ и МПА бактерии однородны по морфологии и окраске, то выде-ленная культура является чистой.
Лабораторная работа № 15
Достарыңызбен бөлісу: |
