Протеолитическая активность определяется наличием ферментов (протеазы), катализирующих расщепление белков на поли- и олигопепти-ды. Протеазы выделяются различными видами бацилл, актиномицетов, мицелиальных грибов и другими микроорганизмами. Активность внекле-точных протеаз определяют, используя в качестве субстрата желатину, ка-зеин или другие белки.
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиоти-ческим веществам. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам удобно определять с помощью выпускаемых промышленностью бумаж-ных дисков, пропитанных определенными антибиотиками. Концентрация антибиотиков в дисках подобрана с таким расчетом, чтобы диаметры за-держки роста стандартных тест-организмов были 28-32 мм. Если иссле-дуемые микроорганизмы чувствительны к данным антибиотикам, то во-круг дисков образуются зоны отсутствия роста. Диаметр зоны измеряют миллиметровой линейкой. Зона более 30 мм свидетельствует о высокой чувствительности микроорганизма к антибиотику, а менее 12 мм - о сла-бой чувствительности.
Лабораторная работа № 21 Определение
биохимических свойств Bacillus subtilis
Цель работы. Освоить методики проведения биохимических тестов для определения ферментативных свойств и идентификации бактерий.
Материалы и оборудование. Чистая культура Bacillus subtilis в чашках Петри с МПА, бактериологические петли, спиртовки, стерильные пробирки, предметные стекла, перекись водорода, среды с моно-, ди-, по-лисахаридами и спиртами, содержащие индикаторы; пробирки с МПБ; пробирки с 2 - 3%-ной пептонной водой; растворы цистина и цистеина, лакмусовая бумага, пробирки с мясо-пептонной желатиной, системы инди-каторные бумажные (СИБ) для идентификации энтеробактерий, производ-ства Нижегородского предприятия бактерийных препаратов; стерильный физиологический раствор, термостат с температурой 37 0С.
Ход выполнения работы
Ознакомьтесь с инструкцией, прилагаемой к системе индикатор ной бумажной (СИБ), для идентификации энтеробактерий и выберите с помощью преподавателя необходимый Вам набор тестов из этой системы.
Разлейте стерильный физиологический раствор в стерильные пробирки по 0,3 мл (по две пробирки на один тест: одна контрольная, ин кубируется без бактерий, а вторая - опытная), внесите в ряд опытных про бирок одинаковое количество (одна петля агаровой культуры или 0,1 мл бульонной культуры) исследуемой культуры бактерий.
В соответствии с инструкцией внесите в пробирки бумажные
диски тестов и инкубируйте пробирки при температуре 37 0С в соответст вии с инструкцией.
Засейте чистую культуру исследуемых бактерий бактериологиче ской петлей на среды с моно-, ди-, полисахаридами и спиртами, предос тавленные преподавателем, и инкубируйте их в течение 18 -24 ч при тем пературе 37 °С.
Для определения каталазной активности на предметное стекло нанесите каплю 3%-ного раствора перекиси водорода, внесите в нее петлю исследуемой агаровой или бульонной культуры бактерий и тщательно пе ремешайте. При положительной реакции (наличии каталазы) перекись во дорода будет разлагаться с образованием воды и выделением кислорода в виде пузырьков.
Через 24 ч внимательно просмотрите все контрольные и опытные пробирки с тестами СИБ и посевы на среды с сахарами и спиртами. Ре-зультаты определения ферментативных свойств Bacillus subtilis оформите в виде табл.6
|
|
|
|
|
|
|
Таблица 6
|
|
Ферментативные свойства Bacillus subtilis
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Сахаролитические свойства
|
Протеолитические
|
Наличие
|
|
|
|
|
свойства
|
|
катал азы
|
Глюкоза
|
Лактоза
|
Маннит
|
Сорбит
|
Индол
|
H2S
|
NH3
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Лабораторная работа № 22
Достарыңызбен бөлісу: |