Практикум по промышленной микробиологии Владимир 2015

жүктеу 0,55 Mb.

бет	13/42
Дата	05.12.2022
өлшемі	0,55 Mb.
	#40475
түрі	Практикум

1 ... 9 10 11 12 13 14 15 16 ... 42

Book

Эндоспоры. Эндоспоры образуют бактерии родов Bacillus, Clostridium и некоторых других. Для обнаружения способности клеток к спорообразованию лучше использовать старые культуры. Споры можно обнаружить при наблюдении живых клеток, а также путем дифференци-ального окрашивания цитоплазмы и споры. В случае выявления у микро-организма способности к образованию спор необходимо обратить внима-ние на тип спорообразования (бациллярный, клостридиальный, плектриди-альный), расположение споры в клетке (центральное, эксцентральное или полярное), форму свободных спор (круглая, овальная или продолговатая) и определить их размеры. С этой целью просматривают клетки 2 - 3 - суточной культуры, так как большинство спорообразующих бактерий про-ходят за этот период времени все стадии развития - от вегетативной клет-ки до свободной споры.

Наблюдение спор в живых клетках. Споры по сравнению с цито-плазмой характеризуются более высоким показателем преломления света, поэтому при микроскопировании в светлом поле они видны как более тем-ные включения округлой или овальной формы. При использовании фазо-во-контрастного устройства споры имеют вид светлых включений на фоне почти черных клеток.

Метод выявления спор негативным окрашиванием. На предметном стекле готовят тонкий мазок клеток спорулирующих бактерий, подсуши-вают на воздухе и фиксируют в пламени. Затем на 3 - 5 мин наносят мети-леновый синий или на 1 - 3 мин фуксин, после чего препарат осторожно просушивают на воздухе. Просматривают с иммерсией.

Вегетативные клетки бактерий прокрашиваются, а споры, имеющие многослойную, труднопроницаемую оболочку - нет. Они видны как силь-но преломляющие свет сферические или овальные образования, находящиеся

зависимости от стадии спорообразования внутри или вне клеток бактерий. Метод удобен при количественной оценке процесса спорообразова-

ния путем подсчета количества спор и вегетативных клеток в разных усло-виях роста бактерий.

Дифференциальная окраска споры по методу Пешкова. Споры и ци-топлазму окрашивают при нагревании. Промывание препарата водой ведет к обесцвечиванию цитоплазмы, тогда как спора прочно удерживает краситель.

На обезжиренном предметном стекле готовят мазок, высушивают его на воздухе, фиксируют в пламени горелки и заливают раствором метиле-нового синего по Леффлеру. Краситель доводят до кипения, держа пред-метное стекло над пламенем горелки. По мере испарения красителя добав-ляют новые его порции. Продолжительность окраски, считая с момента за-кипания красителя, - 10 - 20 с. Затем предметное стекло охлаждают, пре-парат тщательно промывают водой, после чего клетки в течение 30 с до-крашивают 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного или саф-ранина. Краситель сливают, препарат промывают водой и просматривают

иммерсионной системой. При правильном окрашивании клетки имеют красный цвет, а споры - синий. Вместо метиленового синего можно ис-пользовать малахитовый зеленый. В этом случае препарат, фиксированный в пламени горелки, заливают на 7 - 10 мин 7,5%-ным раствором малахито-вого зеленого. Окрашивание проводят с подогревом, помещая препарат над сосудом с кипящей водой или над пламенем горелки. По окончании окраски предметное стекло охлаждают, промывают препарат водой и до-крашивают клетки 0,25%-ным водным раствором сафранина в течение 1 - 2 мин. Споры окрашиваются в зеленый цвет, клетки - в розовый.

жүктеу 0,55 Mb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 ... 9 10 11 12 13 14 15 16 ... 42