1- кезең Денатурация (93-95 0 С) 2- кезең Праймерлерді күйдіру (50-65 0 С) ДНҚ

63
Осылайша, ерітіндідегі ампликондардың жинақталуы 2
n 
формула-
сы бойынша жүреді, мұндағы, n – амплификация циклдерінің саны. 
Сондықтан егер бастапқы ерітіндіде тек бір екітізбекті ДНҚ молеку-
ласы болса, 35 цикл ішінде ерітіндіде теориялық түрде ампликонның 
30 млрд-тан астам молекуласы жинақталуы тиіс. Агарозды гельде 
фрагментті электрофорез əдісімен визуалды түрде анықтау үшін осы 
мөлшер жеткілікті болады.
Шын мəнінде, амплификацияның жекелеген циклдерінің 
тиімділігі кейбір мəліметтер бойынша 78-97% құрайды. Сынамада 
реакция ингибиторлары болса, бұл мəн едəуір төмен болуы мүмкін, 
амплификацияның спецификалық өнімдерінің шынайы санын:
А = М(1+Е)
п
,
теңдеуі бойынша дəлірек анықтауға болады.
Мұндағы, 
М 
– ДНҚ-нысаналарының бастапқы мөлшері; 
n
–ам-
плификация циклдерінің мөлшері;
 Е
– реакция тиімділігі.
ДНҚ-ның
ізделіп отырған бөлімі
5-сурет.
Амплификация өнімдерінің экспоненциалды 
түрде жинақталуы
Амплификация процесінде, бастапқы тізбектегі ұзын фрагмент-
тер де синтезделеді, бірақ олардың жинақталуы тек арифметикалық 
прогрессияда: 

64
К=Мп
формуласымен жүреді
Мұндағы, 
К
-амплификацияның ұзын өнімдерінің саны; 
п
-циклдер 
саны.
Осылайша, соңы праймерлермен шектелген спецификалық фраг-
менттер алғаш рет екінші цикл соңында пайда болады, геометриялық 
прогрессияда жинақталады жəне кейінірек амплификация өнімдері 
арасында басымдықты иеленеді.

жүктеу 1,24 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: