Амплификация өнімдерін детектрлеу

65
де ДНҚ-ның арнайы бояуышы қосылған ерігеннен кейін қатып 
қалған агароздан тұрады, оларға мысалы, ДНҚ-ның арнайы бо-
яуышына екітізбекті ДНҚ фрагменттерімен төзімді қосылыстар 
түзетін бромды этидия жатады.
Гельге құю кезінде тарақтар көмегімен арнайы шұңқырлар 
қалыптастырады, кейін бұл шұңқырларға амплификация өнімдері 
салынады. Гель пластинасын горизонтальды гель-электрофорезге 
арналған аппаратқа салады жəне тұрақты кернеу көзіне қосады. 
Теріс зарядталған ДНҚ гельде «минустан» «плюсқа» қарай қозғала 
бастайды. ДНҚ-ның өте қысқа молекулалары ұзын молекулаларға 
қарағанда, жылдам қозғалады, ал бір өлшемдегі молекулалар 
бірдей жылдамдықпен қозғалады. Гельдегі ДНҚ-ның қозғалу 
жылдамдығына агароз концентрациясы, электр өрісінің кернеулігі, 
температура, электрофорездік буфер жəне аз деңгейде ДНҚ құрамы 
əсер етеді.
10 минуттан 1 сағатқа дейін созылатын электрофорез 
аяқталғаннан кейін гельді ультракүлгін диапозонда (254-310 нм) 
жарық шығаратын трансиллюминатор фильтріне салады. ДНҚ 
жұтатын ультракүлгін энергиясы 260 нм аймағында бояуыш мо-
лекуласына беріледі, ДНҚ жұтатын ультракүлгін энергиясы бо-
яуыш молекулаларын көрінетін спектрдің қызғылт-қызыл облы-
сында сəуле шашуға (флуорисцерлеу) мəжбүрлейді, бұл, агарозды 
гельде амплификациялық қоспаны электрофоретикалық түрде 
бөлгеннен кейін, оларды жарқыраған жолақтар ретінде тіркеуге 
мүмкіндік береді (
6-сурет
).

жүктеу 1,24 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: