Резюме описание и значение заболевания

Блокирующий иммуноферментный анализ - сывороточный ИФА

жүктеу 51,05 Kb.

бет	12/20
Дата	16.01.2022
өлшемі	51,05 Kb.
	#32589

1 ... 8 9 10 11 12 13 14 15 ... 20

2.04.10 МЭБ лейкоз на рус.яз

Процедура испытания

2.1.1. Блокирующий иммуноферментный анализ - сывороточный ИФА

Следующий метод подходит для обнаружения антител в единичных или объединенных образцах сыворотки крови.

Процедура испытания

Покрытие плиты

Все лунки покрывают антителом BLV, предварительно разведенным в буфере покрытия (100 мкл/лунка), пластину герметизируют и инкубируют в течение 18 часов при температуре 4°С. Выполняется цикл промывки (стандартная промывка), который состоит из трех промывок, заполняющих лунки до верха, с 3-минутным замачиванием между каждой промывкой, а затем пластина промокается. Добавляют BLV-антиген, предварительно разведенный в промывочном буфере (100 мкл/лунка), пластину герметизируют и инкубируют в течение 2 часов при 37°С. Выполняется стандартный цикл стирки.

Подготовка и добавление проб и средств контроля

Положительные и отрицательные контрольные сыворотки предварительно разбавляют (1/2) в промывочном буфере и добавляют раствор в четыре лунки на каждую контрольную (100 мкл/лунку). Для тестирования Объединенных образцов можно насыпать 80 сывороток , затем разбавить (1/2) промывочным буфером и добавить раствор в две лунки (100 мкл/лунка) на образец. Единичные пробы следует разбавлять 1/100 с помощью промывочного буфера и добавлять раствор в две лунки (100 мкл/лунку) на каждую пробу. После нанесения покрытия на образцы пластину герметизируют и инкубируют в течение 18 часов при температуре 4°C. Кратковременная промывка производится путем заполнения колодцев и немедленного их опорожнения.

Получение и добавление конъюгатов и субстрата

Предварительно разведенное биотинилированное антитело добавляют (100 мкл/лунку) во все лунки – предварительно разведенное с использованием промывочного буфера + 10% фетальной телячьей сыворотки – пластину герметизируют и инкубируют на качающемся столе в течение 1 часа при температуре 37°С. Cтандартная промывка производится так, как описано ранее. Пероксидазосодержащий конъюгат предварительно разбавляют в промывочном буфере и добавляют раствор во все лунки (100 мкл/лунку). Пластину герметизируют и инкубируют на качающемся столе в течение 30 минут при 37°С. проводят стандартную промывку. Во все лунки добавляют 100 мкл ортофениламин-диаминового субстрата пластину закрывают крышкой и оставляют в темноте на 9 минут. Реакцию останавливают 100 мкл 0,5 м серной кислоты на лунку.

жүктеу 51,05 Kb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 ... 8 9 10 11 12 13 14 15 ... 20