Стерилизация питательных сред насыщенным паром под давле-нием (автоклавирование)

Совместное действие высокой температуры и давления пара обеспе-чивает особую эффективность данного способа (табл. 1).

Таблица 1

При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганиз-мов. Установлено, что споры большинства микроорганизмов не выдержи-

вают и 5-минутную экспозицию в насыщенном паре при 121 °С. Стерили-зацию текучим паром под давлением осуществляют в автоклавах. Авто-клав представляет собой металлический двустенный резервуар, способный выдерживать высокое давление, в который помещают стерилизуемый ма-териал на специальную подставку. Предметы следует размещать не слиш-ком плотно, так как пар должен проходить между ними, иначе они не на-греваются до нужной температуры и могут остаться нестерильными. По окончании времени стерилизации автоклав открывают, когда давление в нем сравняется с атмосферным. Преждевременное открывание крана автоклава недопустимо, так как перегретые среды при резком снижении давления сразу же бурно закипают, смачивают и даже иногда выталкивают ватные пробки, что нарушает впоследствии стерильность материала.

• 
  работе с автоклавом допускаются только подготовленные лица!
  

жидкости теряются в результате испарения, поэтому рекомендуется в при-готавливаемые среды добавлять сверх объема примерно 5% дистиллиро-ванной воды. Тогда после стерилизации среда (раствор) будет иметь тре-буемую концентрацию. Среды обычно стерилизуют в пробирках, колбах, бутылях. Емкости заполняют средой не более чем на половину их высоты, чтобы предотвратить смачивание пробок. Сосуды со средами закрывают ватными пробками с бумажными колпачками. Стеклянные, резиновые, корковые и другие пробки завертывают в двойной слой оберточной бумаги и стерилизуют привязанными к склянке, закрытой ватной пробкой.

Температура и длительность автоклавирования питательных сред определяются, прежде всего, их составом, термоустойчивостью или термо-лабильностью компонентов. Такие легко разрушающиеся субстраты, как молоко или желатиновые среды, а также субстраты, содержащие сахара,

витамины (пивное сусло, соки, дрожжевой автолизат и др.) обычно стери-лизуют при 0,5 атм в течение 1 5 - 3 0 мин. Мясопептонные среды можно стерилизовать при 1,0 атм 20 мин. С трудом поддаются стерилизации в ав-токлаве различные порошки (например тальк) и вязкие жидкости (глице-рин, вазелиновое масло), поэтому их лучше стерилизовать в сушильных шкафах при 160 °С в течение 2 или 1 ч при 170 °С. В этом случае слой мас-ла или порошка в сосуде не должен превышать 1,5 см. После автоклавиро-вания среды для проверки стерильности выдерживают 2 - 3 сут в термо-стате при 30 0С. Если в средах обнаруживается рост микроорганизмов, их готовят заново.

Тиндализация, дробная стерилизация, была предложена в 1877 г. Тиндалем. Она применяется для сред, портящихся под действием темпера-тур выше 100 °С. Тиндализацию осуществляют текучим паром а автоклаве

• 
  незавинченной крышкой или в аппарате Коха. Среды прогревают не-
  

сколько раз по 10 - 15 мин. Между прогреваниями среды ставят в термо-стат при температуре 3 0 ⁰ С н а 8 - 1 2 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды, не выдерживающие нагревания при 100 °С, прогревают более осторожно при 60 - 80 °С через каждые 8 - 1 2 ч 4 - 5 дней подряд.

Однократный прогрев материала при температуре ниже 100 0С из-вестен под названием пастеризация. Этот метод, предложенный Пасте-ром, предназначен для уничтожения только бесспоровых форм микроорга-низмов. Следовательно, в подавляющем большинстве случаев он не обес-печивает стерильности. Пастеризацию проводят при 60-80 0С 10 - 30 мин. Этот процесс используют в пищевой промышленности для обработки мо-лока, фруктовых соков, вина, пива и др.

Фильтрованием стерилизуют синтетические среды строго опреде-ленного состава, которые содержат легкоразрушающиеся или летучие компоненты - витамины, аминокислоты (цистеин и цистин), белки, угле-воды, антибиотики и др. Фильтрование жидкостей осуществляют через мелкопористые материалы, легко адсорбирующие клетки микроорганиз-мов: асбест, целлюлозу, фарфор, каолин и др.

Стерилизующими фильтрами теоретически считают такие, размер пор которых не превышает 0,20 мкм. Наиболее широкое распространение в

микробиологической практике получили мембранные фильтры, которые в зависимости от величины пор применяют для фильтрования и стерилиза-ции. Для стерилизации используют отечественные фильтры фирм «Влади-пор», «Владисарт» с диаметром пор 0,20 мкм.

Плотные диски, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой, на-зываются фильтрами Зейтца. В зависимости от диаметра пор они обозна-чаются разными индексами. Стерилизующими являются СФ-3 и СФ-4.

Мембранные фильтры стерилизуют автоклавированием при 1 атм 15 мин или длительным кипячением.

Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухо-жаровых) стерилизаторах и сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации и обеспечивающих автоматическое поддержание необходи-мой температуры.

Таблица 2

Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и за-вернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. После этого еѐ загружают в стерилизатор (или в сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого материала. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80 °С, так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться.

Шприцы лучше всего стерилизовать сухим жаром при 160 0С либо в собранном, либо в разобранном виде. В первом случае длительность сте-рилизации 75, во втором - 60 мин. Собранные шприцы вместе с иглой сте-рилизуют в пробирке, закрытой ватной пробкой, разобранные заворачива-ют в бумагу или ткань. Можно стерилизовать шприцы и в автоклаве при 1 атм в течение 15-20 мин. Автоклавируют их только в разобранном виде, иначе они повреждаются.