Рабочая методика Реакция торможения гемагглютинации для тестирования сывороток Подготовка сывороток, антигенов и эритроцитов Подготовка сывороток

Приготовление рабочего раствора антигена

жүктеу 403,18 Kb.

Pdf просмотр

бет	2/4
Дата	24.05.2022
өлшемі	403,18 Kb.
	#38756

1 2 3 4

reak

Приготовление рабочего раствора антигена
1. На V-образных планшетах подпишите названия двух вирусов, которые вы будете
использовать в тесте. Каждый вирус тестируется дважды (см. рис. 5).
2. Добавьте 50 мкл холодного ФСБ в лунки со 2-й по 12-ю в рядах A и B для первого вируса
и в лунки со 2-й по 12-ю в рядах D и E для второго вируса.
3. Добавьте 50 мкл холодного ФСБ во весь ряд H. Этот ряд будет выполнять функцию
контроля эритроцитов.
4. Добавьте 100 мкл первого вируса для тестирования в лунки A1 и B1. Добавьте 100 мкл
второго тестируемого вируса в лунки D1 и E1.
5. Проведите серию двукратных разведений, перенеся 50 мкл из первой лунки в каждую
последующую до 12-й лунки. Из 12-й лунки удалите 50 мкл.
6. Добавьте 50 мкл 0,5 %-й суспензии эритроцитов во все лунки в рядах A, B, D, E и H на
планшете.
7. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.
8. Выдержите при комнатной температуре или при + 4

С в течение 30 минут.
9. Определите титры гемагглютининов, наклонив планшет под углом от 45° до 60°. Осевшие
эритроциты в ряду H должны «потечь» и образовать каплю. Дождитесь, пока эти
эритроциты не перестанут течь, после чего отметьте те лунки, в которых эритроциты
образовали «пуговки» и потекли. Наибольшее разведение вируса, которое дает полную
гемагглютинацию («зонтик»), считается титром гемагглютинина.
10. Разведите вирус в холодном ФСБ таким образом, чтобы приготовить рабочий раствор,
содержащий 8 ГАЕ/50 мкл. Например, у Вас получился титр HA, равный 160. Разделите
его на 8, получите 20. Следовательно, вам необходимо разбавить исходный вирус в 20 раз,
т. е. смешать 1 часть вируса с 19 частями холодного ФСБ.

11. Убедитесь в том, что разведенный вирус содержит 8 ГАЕ на 50 мкл, проведя вторую
реакцию гемагглютинации (РГА), как описано выше. Титр вируса должен равняться 8.
Если у Вас получилось другое число, использовать этот рабочий раствор вируса нельзя!
12. Храните рабочее разведение вируса на льду и используйте в тот же день.
Примечание.
Стандартное рабочее разведение вируса должно иметь титр HA,
равный 8 ГАЕ в 50 мкл. Это то же самое, что и 4 ГАЕ в 25 мкл. При таком титре
наблюдается гемагглютинация в первых четырех лунках при титровании вируса в РГА.
Если полная гемагглютинация наблюдается в 5 лунках, вирус имеет титр 16 ГАЕ/50 мкл и
тестовый антиген должен быть разбавлен в 2 раза. И наоборот, если гемагглютинация
наблюдается только в 3 лунках, то антиген имеет титр 4 ГАЕ/50 мкл. В этом случае к
рабочему разведению вируса надо добавить такой же объем исходного вирусного
раствора, какой был взят вначале. Это удвоит концентрацию вируса в рабочем разведении,
чтобы дать титр 8 ГАЕ/50 мкл. Если после 1–2 исправлений у вас так и не получился титр
8 ГАЕ/50 мкл, процедуру приготовления рабочего раствора вируса лучше повторить
сначала с постановки реакции гемагглютинации.

жүктеу 403,18 Kb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 2 3 4