Құрамында рекомбинантты днқ бар организмдердің қасиеттері

жүктеу 30,73 Kb.

бет	3/6
Дата	29.04.2022
өлшемі	30,73 Kb.
	#38324
түрі	Құрамы

1 2 3 4 5 6

рекомб.днк

Молекулалық клондау - бұл рекомбинантты ДНҚ құру үшін қолданылатын зертханалық процесс.Бұл бірге қолданылатын ең кең қолданылатын екі әдістің бірі полимеразды тізбекті реакция (ПТР), экспериментолог таңдаған кез-келген нақты ДНҚ тізбегінің репликациясын бағыттау үшін қолданылады. Әдістердің екі түбегейлі айырмашылығы бар. Біреуі - молекулалық клондау тірі жасуша ішіндегі ДНҚ-ны репликациялауды қамтиды, ал ПТР пробиркадағы тірі жасушаларсыз ДНҚ-ны көбейтеді. Басқа айырмашылық - клондау ДНҚ тізбегін кесу және қоюды қамтиды, ал ПТР бар тізбекті көшіру арқылы күшейеді.

Рекомбинантты ДНҚ қалыптастыру а клондау векторы, тірі жасушада қайталанатын ДНҚ молекуласы. Векторлар негізінен алынған плазмидалар немесе вирустар, және репликация үшін қажетті генетикалық сигналдарды қамтитын ДНҚ-ның салыстырмалы түрде аз сегменттерін, сонымен қатар шетелдік ДНҚ-ны енгізуге, рекомбинантты ДНҚ-ны қамтитын жасушаларды анықтауға және қажет болған жағдайда бөгде ДНҚ-ны экспрессиялауға ыңғайлы қосымша элементтерді ұсынады. Молекулалық клондау үшін векторды таңдау иесі ағзаның таңдауына, клондалатын ДНҚ-ның мөлшеріне және бөгде ДНҚ-ны қалай көрсетуге болатындығына байланысты.ДНҚ сегменттерін әр түрлі әдістерді қолдану арқылы біріктіруге болады, мысалы, рестрикт ферменті / лигаза клондау немесе Гибсон жиналысы.

Стандартты клондау протоколдарында кез-келген ДНҚ фрагментін клондау жеті кезеңнен тұрады: (1) иесі ағзаны таңдау және клондау векторы, (2) векторлық ДНҚ дайындау, (3) клондалатын ДНҚ дайындау, (4) құру рекомбинантты ДНҚ, (5) рекомбинантты ДНҚ-ны қабылдаушы организмге енгізу, (6) құрамында рекомбинантты ДНҚ бар организмдерді іріктеу және (7) қалаған ДНҚ кірістірулері мен биологиялық қасиеттері бар клондар үшін скрининг.[6]Бұл қадамдар қатысты мақалада егжей-тегжейлі сипатталған (молекулалық клондау).

жүктеу 30,73 Kb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 2 3 4 5 6