Рабочая методика Реакция торможения гемагглютинации для тестирования сывороток Подготовка сывороток, антигенов и эритроцитов Подготовка сывороток

Реакция торможения гемагглютинации (протокол)

жүктеу 403,18 Kb.

Pdf просмотр

бет	3/4
Дата	24.05.2022
өлшемі	403,18 Kb.
	#38756

1 2 3 4

reak

Интерпретация.

Реакция торможения гемагглютинации (протокол)
1. Быстро разморозьте сыворотки на водяной бане при +37 °C. Как только сыворотки
растают, держите их на льду во время работы.
2. Пронумеруйте планшеты и подпишите названия двух тестируемых вирусов. Сыворотки
тестируются в повторах на двух идентичных планшетах (см. рис. 5).
3. Добавьте 25 мкл холодного ФСБ в ряды от B до H (от B1–B11 до H1–H11).
4. Добавьте 50 мкл каждого образца сывороток в первую лунку (A1–A10).
5. Внесите 50 мкл положительного контроля в лунку А11 одного планшета и отрицательного
контроля в лунку A11 второго планшета.
6. Проведите серию двукратных разведений, перемещая 25 мкл сыворотки из A1–11 в лунки
последующих рядов. Последние 25 мкл сыворотки из ряда H утилизируйте.
7. Добавьте 25 мкл рабочего раствора вируса, содержащего 4 ГАЕ, в лунки, содержащие
сыворотки. Обратите внимание на то, что это то же самое, что 50 мкл, содержащих 8 ГАЕ.
8. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.
9. Выдержите при комнатной температуре в течение 30 минут.
10. Добавьте 50 мкл ФСБ в колонку 12, что послужит контролем эритроцитов.
11. Добавьте 50 мкл 0,5 %-й суспензии эритроцитов в каждую лунку.
12. Аккуратно постучите по планшету, чтобы перемешать содержимое.
13. Выдержите при комнатной температуре или при + 4

С в течение 30 минут.

14. Учтите титры сыворотки через 30 минут инкубирования, наклонив планшет под углом от
45° до 60°. Осевшие эритроциты в колонке 12 должны «потечь» и образовать каплю.
Дождитесь, пока эти эритроциты не перестанут течь, после чего отметьте те лунки, в
которых эритроциты образовали «пуговки» и потекли так же, как в 12-й колонке. Лунки,
где произошло полное торможение гемагглютинации, будут выглядеть как контрольные.
Интерпретация.
Если произошло взаимодействие антиген / антитело,
гемагглютинация эритроцитов будет ингибирована. Для записи данных следует
пользоваться следующими знаками: знак «+» – для полной гемагглютинации («зонтик),
знак «+/–» – для частичной гемагглютинации и знак «–» – для торможения
гемагглютинации («пуговка»). Титр в РТГА соответствует наибольшему разведению
сыворотки, которое полностью тормозит гемагглютинацию (последняя «пуговка»).
Необходимо внимательно следить за инкубацией. Если реакция проведена при комнатной
температуре результат следует прочитать сразу после того, как эритроциты в контроле
полностью осядут. Если реакция проведена при температуре + 4

С результат можно
прочитать в течение 0,5-1 часа после того, как эритроциты в контроле полностью осядут.
15.

жүктеу 403,18 Kb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 2 3 4