Выявление кислотоустойчивости. Кислотоустойчивость - свойст-
во, характерное для некоторых микобактерий и нокардий. Оно заключает-ся в сохранении окраски клетками этих бактерий при обработке их кисло-той. Наибольшее распространение получил способ выявления кислото-устойчивости по Циль-Нильсену. На обезжиренном предметном стекле го-товят два мазка: исследуемых клеток и клеток кислотоустойчивых мико-бактерий. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. На мазки помещают фильтровальную бумагу, заливают препарат карболовым фуксином Циля и затем 2 - 3 раза подогревают его до появле-ния паров, держа стекло высоко над пламенем горелки. За появлением па-ров наблюдают, глядя на мазок сбоку, и при их появлении тотчас отстав-ляют препарат в сторону. После этого препарату дают остыть, снимают фильтровальную бумагу, сливают краситель и мазок промывают водой. За-тем препарат обесцвечивают 5%-ным раствором Н2SO4. Для этого пред-метное стекло погружают 2 - 3 раза в стакан с кислотой, не задерживая его
ней. Препарат вновь тщательно промывают водой и докрашивают 3-5 мин метиловым синим по Леффлеру. Краску сливают, препарат промывают во-дой, высушивают и исследуют с иммерсионной системой. При строгом со-блюдении режима окраски кислотоустойчивые клетки приобретают крас-ный цвет, тогда как некислотоустойчивые - синий.
Нуклеоид. Довольно четко нуклеоид обнаруживается у следующих бактерий: Proteus vulgaris, Azotobacter chroococcum, Bacillus megaterium,
Bacillus mycoides, Bacillus subtilis. На предметном стекле делают мазок су-точной культуры бактерий, высушивают его на воздухе и фиксируют в те-чение 2 - 3 мин в парах осмиевой кислоты. С этой целью на дно чашки Петри наносят 2 - 3 капли фиксатора, а предметное стекло помещают маз-ком вниз на обрезки стекла. По окончании фиксации препарат опускают на 2 - 3 мин в стаканчик с раствором 1 н. HCl для гидролиза рибосомальной РНК. Стакан держат на водяной бане при 60 °С. После гидролиза препа-рат немедленно промывают водой. Затем мазок помещают на 15 мин в 1%-ный раствор формалина, вновь промывают водой и окрашивают в тече-ние 1 - 2 мин 0,1 - 1,0%-ным раствором основного фуксина. Препарат промывают, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. Цитоплазма окрашивается в розовый цвет, нуклеоид - в ярко-малиновый.
Достарыңызбен бөлісу: |