Нуклеин қышқылдарын зерттеу әдістері Негізгі принциптері

Southern Blot

• Разрезание ДНК
• Электрофорез ДНК
• Перенос ДНК на мембранный фильтр
• Гибридизация
• Визуализация

Нозерн блоттинг әдісі

• Нозерн-блот (англ. Northern blot) — әдісі мРНК гендерінің экспрессиясын және нұсқадағы фрагменттерін зерттеумен анықталады.
• 1977 жылы Джеймс Олвайн, Дэвид Кемп және Джордж Старк Стэнфорд университетінің қызметкерлері әдісті ашты.
• Саузерн блоттингтен айырмашылығы: анықталатын субстрат ДНК емес, РНК.
• Нитроцеллюлозаның орнына диазобензилоксиметил-целлюлозадан алынған фильтр қолданылады, ал зонд ретінде комплементарлы ДНК молекуласы қолданылады.

Нозерн блот

Анализ схемасы:

Радиоавтография - тірі организмге енгізілген элементтердің жекелеген элементтері мен тіндерін фотопленкалардағы олардың әрекеті арқылы анықтауға мүмкіндік беретін әдіс.

• Радиоавтография - тірі организмге енгізілген элементтердің жекелеген элементтері мен тіндерін фотопленкалардағы олардың әрекеті арқылы анықтауға мүмкіндік беретін әдіс.

• Денсинометрия – сандық анализ.

Микрочиптер- бір уақытта ДНҚ қатарының бірнеше тізбегін анықтауға болады.

ДНК-микрочиптер

- әр түрлі ұлпалардағы гендік экспрессиясы

- қалыпты және патологиялық жағдайда гендік экспрессиясы (қалыпты және ісік жасушаларда)

- сыртқы факторлар арқылы гендік экспрессиясының өзгеруі (жасушалардың патогендермен және дәрілік препаратпен өзара әрекеттесуі)

Жоғары тығыздықты микрочиптер құрастырылды:

• ДНҚ полиморфизмін зерттеу үшін;
• Гендер экспрессиясын зерттеу үшін(анализ РНК);

ДНК-фингепринтинг

• Британиялық генетик А. Джеффрис г. Лестер атындағы университет лаборториясындағы зерттеу барысында хромосомалық ДНҚ генетикалық ауытқушылығын бақылап, ДНҚ рентген суретін қарай келе әр адамның ДНҚ тізбегі ерекше нуклеотид қатарынан тұратынын анықтады. Бұл миоглобин геніне анализ жасауда минисателлиттердің көп болуымен анықталды.

Тапсырма

• Пульс- электрофорез
• Қағаздағы Электрофорез
• Дот-блоттинг
• «Колони» - гибридизациясы.
• ДНҚ микрочиптерінің түрлері және оларды қолдану
• НҚ талдауында спекторфотометрияны қолдану

жүктеу 8,21 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: