Өсімдіктердің кариотипіндегі өзгерістерді анықтау әдісі

Тұқымды өндіру. Алдын-ала 12 сағат көлемінде суға салынған өсімдік тұқымын Петри табақшаларындағы ылғалды фильтр қағаздарында өндіреміз. Ол үшін +25-28⁰С термостатта тұқымның өркені 10-15 мм жеткенше ұстаймыз.

Кариотиптік зерттеу жүргізу немесе хромосомалардың санын анықтау үшін метафазалы пластинка стадиясындағы көп жасушалар қажет.

Фиксация. Цитогенетикалық зерттеулер үшін әдетте хромосома нуклеопротоидтерін коагуляциялайтын фиксаторлар пайдаланылады. Біз ядролық құрылымды зерттеуде кең қолданылатын фиксаторды, яғни 96%-ті сірке қышқылы мен 96%-ті этил спиртінің қоспасы (1:1) қолдандық. Мацерация. Мацерация жасуша аралық байланыстарды әлсірету және жасуша қабырғаларын бұзу үшін пайдаланылады. Мацерация 3,0 N НСІ ерітіндісінде материалды 20-30 минут ұстау арқылы орындалады. Материалды мацерациялаған соң бірінше рет жуады.

Күкірт қышқылды фуксин ерітіндісімен бояу. Фиксацияланған материалды 3 рет дисстилденген сумен жуады. Салқын гидролиз жасалынады. Соның нәтижесінде, ДНК молекуласы пуринді негіздердің әлсіз қышқылды гидролизі нәтижесінде бос альдегид топтары түзіледі де күкірт қышқылды фуксин ерітіндісімен әрекеттеседі. Нәтижесінде хромосомалар күлгін-қызыл түске боялады.

Жасуша аралық байланыс пен жасуша қабықшасын бұзу үшін ферментативті мацерация жүргізіледі. Содан соң объектіні бір тамшы сірке қышқылымен бірге зат шынысына қойып препаратты инемен ұсақтап, бетін жабын шынысымен жабады. Иненің сабымен шынының бетін ұрғылап ауаны шығарады. Фильтр қағазымен жауып қатты басып езеді. Осылайша жазықтықта шашырап жатқан хромосомалардың қабатын алған соң, сірке қышқылы ұшып кетпес үшін препараттың жиегін глицеринмен бекітеді. Дайындалған препарат МБИ-3 жарық микроскоптарының көмегімен (х90 обьективпен үлкейту арқылы) зерттеледі.

4. 
   
   
   жүктеу 0,91 Mb.
   
   Достарыңызбен бөлісу: